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다광자 공초점 레이저 현미경 시스템 A1 MP+/A1R MP+는 이전의 공초점 현미경의 한계를 능가한 압도적인 고감도로, 생체의 심부까지 고속으로 선명한 이미지를 취득할 수 있습니다. 정립현미경, 도립현미경과도 대응 가능하고, 뇌신경 연구나 in vivo(생체內) 생체 이미징 등에, 사용하기 편리한 다광자 이미징 환경을 제공합니다.
이전의 갈바노스캐너에 비해 광시야 이미지를 고속으로 취득할 수 있는 레조넌트스캐너에 의해 포인트 스캔 방식으로는 세계최고속도로 초당 420프레임의 이미지 취득을 실현합니다. 니콘 독자적인 ‘광학 pixel clock 방식’ 에 의해, 고속에서도 안정된 고정밀 이미지 생성을 실현합니다. in vivo 생체 조직 반응과 세포의 동태나 상호작용 등의 빠른 변화를 놓치지 않고 선명히 파악할 수 있습니다.
생체내 순환의 가시화
A1R MP+의 초고속 공명스캐너를 사용하고, 생체 내에서 혈관내의 혈구 등의 움직임을 펨토(1000조분의1)초 IR맥박 레이저로 여기하여, 3종류의 형광 이미지를 동시에 초당 30프레임으로 취득했습니다.
다광자로의 심부 여기의 경우 형광의 산란이 크기 때문에 이전의 핀홀을 개입시킨 수광기(受光器)에서는 밝은 이미지 생성이 힘들었습니다. A1MP+/A1RMP+는 고감도 수광기(NDD)를 표본으로 할 수 있을만큼 가까운 위치에 설치하는 것으로, 생체 심부로부터의 산란빛을 확실히 받아 밝은 이미지를 생성합니다. 또한 NDD의 4ch로 취득한 이미지의 혼선이 큰 경우, 형광 분리에 의해서 색소를 명확하게 분리할 수 있습니다.
자가 형광의 제거에 의해, 심부에서도 대조가 높은 이미지를 얻을 수 있습니다.
또, 반사 NDD와 투과 NDD를 조합해 사용하는 것으로써, 반사 형광 신호 뿐만이 아니라 투과 형광 신호도 검출하고, 보다 밝은 이미지를 취득할 수 있습니다.
 4ch 반사 NDD لch 투과 NDD
실험쥐 대뇌 피질의 in vivo심부 이미징
H-line 실험쥐(5주령)의 대뇌 피질을 open skull 법으로 관찰했습니다. EYFP를 발현하는 레이어 V층의 원추 세포의 표면 부근의 수상 돌기에서 기저 수상 돌기까지 모두 가시화했습니다. 또한 심부 백질의 형광도 관찰되었습니다.

실험쥐 대뇌 피질의 다색 이미징
950 nm의 IR 여기 광선을 이용해 마취 된 YFP-H 실험쥐의 SHG( 제2차 고조파)신호와 2개의 형광 신호 3채널을 동시에 취득하였습니다.

파랑 : 경막의 SHGP 노랑 : 대뇌 피질 제V층의 원추 세포에서 EYFP형광 신호 빨강 : 혈액 중의 SRB형광 신호 촬영 협력 : 홋카이도 대학 전자 과학 연구소 생체 물리 연구 분야 카와 료스케 선생님, 히비 테루마사 선생님, 네모토 토모키 선생님
신개발의 GaAsP NDD는 스탠다드 NDD보다 약2배의 고감도를 달성합니다. 생체 시료보다 깊은 위치의 신호를 선명하게 취득할 수 있습니다. 초고감도이므로 레이저 강도를 억제하고 형광 신호의 취득이 가능하기 때문에, 생체의 광독성을 줄일 수 있습니다. 또한 밝은 이미지를 취득할 수 있으므로 보다 빠르게 고화질의 Z스택 이미지를 얻을 수 있습니다.
마우스 뇌 in vivo심부 이미징
마취 된 YFP-H 실험쥐(4주령)를 open skull법으로 in vivo 관찰을 했습니다. 레이어 V층의 원추 세포 전체와 해마 뉴런의 심부가 가시화되며 1.1 mm이상 깊이의 해마 원추 세포의 수상 돌기의 3차원 이미징도 성공했습니다.

자외선부터 근적외선 영역까지 광범위한 파장으로 색수차를 보정한 고NA대물렌즈 시리즈를 신개발 하였습니다. 나노 크리스탈 코트에 의해 광범위 파장으로의 높은 투과율을 달성합니다. 특히 CFI 애퍼크로맷(색수차를 극도로 줄이기 위하여 특수한 광학 유리로 짜맞춘 렌즈) 25xW MP는 다광자 여기 전용의 대물렌즈로서 1.10의 고NA와 2.0mm의 긴 작동 거리를 실현하는 것과 동시에 표본의 깊이에 따라 구면 수차를 보정할 수 있는 보정 링의 탑재에 의해서 표본 심부에서도 높은 여기 효율을 얻을 수 있습니다. 또, manipulator의 접근 각도(33°)도 확보해, 고화질의 다광자 여기 관찰과 활용성을 동시에 실현하였습니다.
나노 크리스탈 코트는 반도체 제조 장치의 투영 렌즈에 있는 니콘 독자적인 초저굴절률의 박막 기술입니다.
수나노미터 입자의 밀도인 얇은 막을 형성하는 것으로, 넓은 파장역에 대한 반사를 억제해 투과율을 높입니다.

| CFI75 Apo 25xW MP |
NA 1.1 WD 2.0 Nano Crystal Coat |
| CFI Apo LWD 40xWI λS |
NA 1.15 WD 0.6 Nano Crystal Coat |
| CFI Apo 40xWI λS |
NA 1.25 WD 0.18 Nano Crystal Coat |
| CFI Plan Apo IR 60xWI |
NA 1.27 WD 0.17 Nano Crystal Coat |
다광자 여기용 진동 레이저는 약 700~1000nm의 범위에서 가변이므로, 다양한 형광 표시를 할 수 있습니다. 이전에는 파장을 변경할 경우에 생기는 광학계의 전환을 수정하는 것이 어려웠습니다. A1MP+/A1RMP+에서는 입사 광학계에 내장한 수정 기구에 의해 원클릭으로 간단하고 재빠르게 광학 위치조정을 수정해 여기 효율을 최적화합니다.

A1 MP+는 고해상도 이미징을 가능하게 하는 제어갈바노스캐너를 탑재하였습니다. A1RMP+는 제어갈바노스캐너에 더하여, 초고속 공명스캐너를 탑재한 하이브리드 스캐너입니다.
A1RMP+는 초고속으로의 이미지 취득과 광자극에 대해, 세포내 동태나 관련한 해명을 실현합니다.

다광자 여기 이미징의 자유도를 높이는 니콘 공초점 현미경 공통의 간단한 조작

A1MP+/A1RMP+와 NIS-Elements C의 편성으로 외부 주변기기와의 타이밍을 취하거나 스캐닝의 트리거 입력을 실시하는 등의 기능을 사용할 수 있습니다.
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